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冷冻与用于IHC福尔马林固定石蜡包埋组织切片

你考虑增加免疫组织化学(IHC)到您的临床前毒理学研究设计? IHC集成分子病理学和病理组织学的传统以允许测试化合物或细胞靶的可视化 原位。

IHC是适用于各种研究的需要,包括:靶标确认,免疫表型,确定肿瘤或其他病变微血管密度,识别和在动物模型跟踪人类干细胞,以及用于致癌性研究为增加的细胞增殖的示范,难溶识别差异化的肿瘤,揭示试验品有关肿瘤的分子特征。 IHC结果可以定量并使用数字成像软件进行比较。

第一决定之一进行规划时IHC是组织固定方法。这是您的IHC应用的最佳原料,冷冻组织或福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织?而抗原检索技术在过去二十年的发展具有改善的抗体 - 抗原结合和检测在FFPE组织,一些抗原(包括某些白细胞表面标志)不能存活福尔马林固定,石蜡包埋,必须冷冻切片进行评估。  

用于IHC冷冻组织处理涉及快速冷冻新鲜组织,在一个特定的目的的培养基将其嵌入(如辛)中,用低温恒温器,通常接着用丙酮或乙醇短固定切片它。冷冻组织切片的优点包括抗原的天然蛋白质结构的保留和福尔马林的使用避免,这是一种毒性和致癌化合物。缺点包括组织形态的损失,由于在冷冻组织收集被添加到您的尸检,冷藏物流,与异戊烷的用于快速冷冻的使用,这是一个冰冻的神器和低温恒温器生成的部分,劳动力和材料要求的厚度有害物质。

当FFPE组织用于IHC,10%中性缓冲的福尔马林(NBF)的标准组织学固定剂是足够的。之前石蜡包埋固定的时间一般限于24-48小时,这大大有助于抗原完整性的保持。 FFPE部IHC的优点包括优良的组织形态和易于掺入到常规组织收集,处理和存储。的主要缺点是蛋白质,它们通常可以用一个短暂的热,化学或酶基抗原检索步骤颠倒的交联。

这已被证实与威尼斯赌博游戏中使用的物种FFPE组织正在迅速扩大反应的市售抗体的数量。用于IHC使用FFPE组织的提供了最佳的组织形态,这有利于组织和细胞内靶抗原位置的识别。与易于集成到常规组织处理一起,这些优势中证明,其中抗原 - 抗体结合不被排除过程应用FFPE组织使用的选择。

理想情况下,你应该IHC计划组织收集之前建立适当的固定剂的选择和时机。决定什么目标(S)你想在哪个组织(一个或多个)可视化,研究现有的抗体,并查看已与您所选择的抗体成功地使用固定的方法。当抗体已经在这两个冷冻和FFPE组织成功地使用,我们建议FFPE方法。

并记住,无论哪个固定技术使用的,当务之急是目的地为IHC组织被收集和固定的或死亡后迅速冷冻以排除所关注的抗原的自溶破坏。更好的组织质量,更清晰的结果将是!

在HSRL与我们联系 讨论IHC有何好处临床前毒理学研究。

 

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