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IHC或者:这是最适合我的学习?

免疫组织化学(IHC)和免疫荧光(IF)是涉及使用抗体以在显微镜载玻片上的组织内检测特定的蛋白质分子测定

与IHC,蛋白质可视化用彩色色原,并用明场显微镜下观察。  而用如果,将蛋白质可视化用荧光染料,并用荧光显微镜观察。  每一种方法可以在任意的福尔马林固定,石蜡包埋(FFPE)组织一起使用或快速冷冻,冷冻切片的组织。  IHC和如果可用于检测组织中或抗体的单一蛋白质可以被复用,以检测在一个滑动两个或更多个蛋白。 复用是查看如何蛋白在组织内一起相互作用或同时看到多个不同的细胞群的好方法。  每一种方法都有其优点和缺点。 

生色IHC通常涉及使用具有苏木精复一个DAB显色。  DAB的最常见的形式是棕色;这将产生幻灯片与兰色核清脆棕色阳性染色。  最近,民建联已成为额外的颜色可供选择,如紫色,红色,绿色,黄色和黑色连。   备用counterstains,如甲基绿或核固红可用于突出显示与这些彩色色原的阳性染色。  的IHC一个最大的优势,如果以上是事实,IHC染色是永久性的,不会褪色一样,如果染色一样。  幻灯片可以存档和查看几年,甚至几十年,后来和染色还是应该看起来是一样的。此外,组织结构和形态是在IHC染色的载玻片更加显而易见,使得解释更容易。

复用生色IHC通常用于突出显示不同的细胞群体不重叠。 然而,这并不是最好的选择,如果在小区内的共定位是期望的。  下面是用不同颜色的色原GFAP显色IHC污渍的一些照片:

GFAP (brown) Hem counterstain_square GFAP (green) Hem counterstain_square

GFAP与传统的DAB(褐色)和显色苏木(蓝色)染液

GFAP绿色和苏木(蓝色)染液

GFAP (purple) Green counterstain_square GFAP (red) Hem counterstain_square

GFAP紫色色和甲基绿染液

GFAP红色发色和苏木(蓝色)染液

如果是选择用于复染色方法,特别是当共定位期望或当需要多于2种不同的抗体。如果用染色,抗体 针对特定的蛋白质被添加到幻灯片,并且然后用荧光染料可视化并用荧光显微镜观察。

下面是通常在HSRL使用的荧光染料的列表。 HSRL具有可如果染色片滨松S60扫描仪。

  • FITC(荧光素)/ CY 2 / Alexa氟488(绿色)
  • 得克萨斯红/ Alexa氟594(红色)
  • 的Cy5 / Alexa氟647(远红外)
  • 若丹明/ Cy3的/ TRITC / Alexa的fluor555(绿黄色)
  • DAPI / Hoechst的(蓝色)

多路复用如果染色是识别不同的细胞群,以及那些表达多于一个的标记的有效方法。  它正在成为免疫肿瘤学研究,其中多个不同的细胞群体可以在一个滑动被看作非常普遍。

下面是其中复用,如果采用上脑组织的图像:

GFAP488 IBA594 40xb_square GFAP488 Vimentin594 40x_square

GFAP(绿色)和iba1(红色)与DAPI(蓝色)复染。

注意,有GFAP和iba1抗体染色2个不同的细胞群,因此不存在的共定位

GFAP(绿色)和波形(红色)与DAPI(蓝色)复染。

注意,GFAP和波形蛋白抗体染色都相同的细胞群,因此染色共定位和细胞出现黄色

 

也有一些缺点,使用免疫荧光。 

  • 荧光信号会褪色随着时间的推移,最终将消失。 因为这个原因,它以记录与任一标准的显微照片或整个幻灯片扫描的结果是很重要的。
  • 许多组织元素将自发荧光(它们将发出荧光他们是否已被染色如果技术)。 一些常见的自发荧光元素是:胶原,弹性蛋白,脂褐质,红血细胞,嗜中性粒细胞,血管,脂肪细胞。  因为这个原因,它运行的同型对照,甚至还没有被沾上任何东西来比较测试组织切片是非常重要的。
    • 自体荧光可以用多种方式来最小化:
      • 使用冷冻切片代替FFPE组织(自发荧光是在FFPE组织增加)的
      • 消除使用绿色染料(大多数元素自发荧光是在这个信道)
      • 使用的自体荧光淬灭技术
      • 使用酪胺信号放大,以增加真正的信号,这将压倒自发荧光
    • 漂白也可以是一个问题。 此当荧光信号消失由于光的长时间暴露发生。  这是与Alexa Fluor染料比传统的荧光染料较少的问题。

HSRL训练有素的科学家团队可以通过提供关于输入你的研究目标,协助其IHC或者标记将是最有效的学业。我们是精通两种GLP和非GLP IHC方法开发和将优化适合您研究需求的抗体。我们的内部滨松S60幻灯片扫描仪能够既明和荧光扫描。我们很高兴与您有关的组织收集和固定程序,这将导致最佳的染色效果的建议进行磋商。

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HSRL Specializes in Histo路径ology & Specimen Storage 服务

 

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